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细胞培养基
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细胞培养基
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细胞培养基
2021-04-29

细胞生长速度变慢或细胞形态变差的原因较为复杂,可从细胞,细胞培养液,污染,操作等方面去分析。比如:细胞衰老、细胞代次过高、细胞被胰酶消化过度,细胞培养液配制或储存不当,支原体污染,细胞接种密度低,温度/CO2浓度/pH等生化条件变化方面去分析,也需要考虑到血清是否有更换,血清来源不可靠,质量不稳定均会导致细胞状态出现变化。

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细胞培养基
2021-04-29 13:34:04
不建议配制培养液时调整配方的 NaHCO3 浓度,因为 HCO3-/CO2 体系的缓冲能力与 NaHCO3 浓度有关。
如果过滤前培养液的 pH 过高,用 1mol/L HCL 进行调整。如果 pH 过低,用 1mol/L NaOH 进行调整。细胞培养液经过 0.22um 滤膜过滤后,pH一般会提高 0.1-0.2 左右。同时建议配液严格按照使用说明书进行。
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细胞培养基
2021-04-29 13:33:34
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细胞培养基
2021-04-29

细胞驯化过程是细胞优胜劣汰,适者生存的过程,状态不好或者死亡的细胞特别容易结团。在驯化过程中可以采用低速离心,自然沉降,胰酶消化,添加硫酸葡聚糖等方法逐步去除较大的细胞结团,不断传代驯化。另外,细胞出现结团与细胞培养基适应与否,Ca 2+Mg 2+离子浓度,种子细胞质量等有较大关系。

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细胞培养基
2021-04-29 13:33:01
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细胞培养基
2021-04-29

丙酮酸钠可作为替代碳源。尽管细胞倾向于以葡萄糖作为碳源,但是在没有葡萄糖时,细胞可以代谢丙酮酸钠。

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细胞培养基
2021-04-29 13:32:05
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细胞培养基
2021-04-29

不添加生长因子。

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2021-04-29 13:25:52
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细胞培养基
2021-04-29

内毒素的控制必须从培养基配方开发到最终生产进行全程监控。配方开发时动物源性蛋白的选择与否、各类原材料的供应商筛选、生产车间净化级别、生产设备和器具的消毒、物料干燥、生产过程控制、人员操作规范等全过程控制内毒素,严格执行 GMP 管理制度,生产高质量培养基。

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细胞培养基
2021-04-29 13:24:06
可以。Vero 细胞一般需要驯化适应过程。
在方瓶或者转瓶进行无血清贴壁培养时,细胞逐级放大比例约 1:5-1:6 左右;
在使用纸片载体进行反应器培养时,细胞的逐级放大比例需要达到 1:10 以上。
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细胞培养基
2021-04-29 13:23:31
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细胞培养基
2021-04-29

对于大部分昆虫细胞,pH 在 6.0-6.4 范围效果较好,最适渗透压在 345-380mOsm/kg。

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2021-04-29 13:22:42
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细胞培养基
2021-04-29
谷氨酰胺在溶液中很不稳定,容易降解,产生对细胞有毒害作用的氨离子。在37℃的环境中放置3天,培养液中的谷氨酰胺会有一些降解
所以,目前一些细胞培养基常补充谷丙二肽来代替谷氨酰胺。含谷氨酰胺的细胞培养液,建议现配现用,在 4℃冰箱保存时间不超过 2 周。若单独补加谷氨酰胺浓缩液,则浓缩液应置于-20℃冰冻保存,用前加入培养基中。
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细胞培养基
2021-04-29 13:34:29
0.1% 柠檬酸-结晶紫溶液染色1h以上基本可以把纸片载体上的细胞都染色,计数前需要用力摇晃装有载体的离心管,使细胞充分脱落;染色液浓度太高会使细胞核破裂,因此不建议追求高染液浓度。
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细胞培养基
2021-04-18 19:06:50
可以,但必要性不大,把溶氧控制在40%,通过PID控住浮动范围在上下5%即可满足细胞培养条件。
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2021-04-18 19:07:53
天信和的生物反应器是在控制柜内有分流前的汇总,通过一根管路总输出,但一般不用二氧化碳进行酸度调节,只控制进碱(0.5mol/L-1mol/L的氢氧化钠溶液)量来调整pH。
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细胞培养基
2021-04-18 19:07:29

1)这是边缘效应的体现,细胞工厂面积稍大,会有受热不匀的情况,可以提前在工厂中加入培养液放置温箱预热好,现象会有所改善。

2)目前我们的细胞工厂用的是普通材质的,较cell bind处理过的细胞贴壁生长效果会稍差一些,一般就使用一次,边缘有少星细胞脱落影响不是很大。

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细胞培养基
2021-04-29 11:18:51
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细胞培养基
2021-04-29

建议2-3代,从复苏时的10%NBS逐步降为无血清培养。

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细胞培养基
2021-04-29 11:23:30

天信和630培养基所培养的Vero无血清细胞形态与进口培养基有一定区别,主要因为两种培养基成分差异及天信和630培养基的冰点渗透压高于进口培养基20%,但并不影响细胞生长与后期接毒,且天信和630培养基培养Vero细胞生长速率高于进口培养基,宿主细胞DNA、宿主细胞蛋白含量等明显低于进口培养基,有明显的优势,目前暂时不做调整。

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细胞培养基
2021-04-29 11:24:47

低密度接种,稍微延长培养时间,细胞也可生长至致密,但暂未尝试低密度连续传代,目前天信和推荐稍高密度接种,更有利于细胞状态与增殖速度的保持。

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细胞培养基
2021-04-29 11:25:18

细胞具体生长密度和细胞来源、细胞状态、接种密度、培养基、环境控制有关,没有比较固定的数量。但确定了具体细胞、培养基、培养条件,细胞每代数据应平行。

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细胞培养基
2021-04-29 11:25:59

根据厂家提供培养基使用说明就能保证培养基安全有效。血清即可过滤前添加也可过滤后添加,具体根据无菌控制要求操作。

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细胞培养基
2021-04-29 11:26:38
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细胞培养基
2021-04-29

细胞工厂为一次性使用产品,不建议重复使用。如需反复使用,接毒后有大量完整细胞残留,可用胰酶消化后PBS冲洗干净辐照灭菌继续使用;接毒后细胞破碎,可用碱液浸泡后PBS清洗干净辐照灭菌继续使用。

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细胞培养基
2021-04-29 11:27:19

细胞消化时需要注意胰酶添加量控制,保证每1层细胞工厂有适量胰酶流入。胰酶作用消化时,密切关注细胞脱落变化情况,及时终止消化。如有轻微结团可在消化终止后用力摇晃细胞工厂的细胞悬液数次。

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细胞培养基
2021-04-29 11:27:36
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