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天信和Industrack — Vero无血清细胞培养基技术应用交流会
来源: | 作者:天信和生物研发中心 | 发布时间: 153天前 | 390 次浏览 | 分享到:


      Vero 细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。随着对疫苗质量和安全性要求的不断提高,使用无血清工艺取代血清工艺培养 Vero 细胞生产病毒疫苗已成为发展趋势。天信和(苏州)生物科技有限公司于201971日至5日举办了Industrack技术培训——Vero细胞培养基技术应用交流会。


       本次Vero细胞无血清培养基技术应用交流会邀请了大连雅立峰、广州诺诚、宁波荣安、吉林迈丰、长春卓谊、成都柏奥特克、北京生物制品研究所、江苏金迪克、青岛蔚蓝等9家人用/兽用疫苗单位的老师们参加。 培训交流过程从Vero细胞无血清消化、传代等关键点控制,到细胞扩增至14L DISK生物反应器培养,进行技术应用实操和交流,期间成都柏奥特克黄林老师分享了使用天信和Vero细胞无血清培养基进行人用狂犬疫苗生产方面的心得体会。












 

Vero细胞方瓶、细胞工厂贴壁培养传代实验

笔记关键词:使用经625无血清培养基(天信和Vero细胞无血清培养基)驯化完成的Vero细胞,在方瓶和细胞工厂中进行连续传代扩增,可以保持良好的生长速率和生长状态,培养3天,细胞可增殖45倍左右。

 

1625培养基培养Vero细胞72h

从图1可见,Vero细胞在方瓶中无血清培养72h后,细胞轮廓清晰,立体感强。

                                                                                                          1. Vero无血清细胞培养3天生长情况(方瓶)
                                                                                           


2. Vero无血清细胞培养3天生长情况(细胞工厂)

 

从表1、表2可见, 在无血清的连续传代过程中,Vero细胞在625 无血清培养基中保持有良好的生长状态和生长速率。增殖比例基本在4-5倍左右。


 

14L固定床生物反应器无血清培养Vero细胞

 

笔记关键词:使用625无血清培养基和天信和14L DISK生物反应器进行Vero细胞无血清大规模培养,为后期Vero无血清生物反应器生产狂犬疫苗工艺打下基础。14L固定床反应器装载70g片状载体,培养结束后采用结晶紫染色法进行细胞核计数。

2.1 固定床生物反应器培养Vero细胞时细胞生长情况

       使用细胞工厂进行种子细胞的扩增,消化3 10层细胞工厂接种生物反应器,接种密度为9×104cells/ cm2,由于技术交流时间有限,在培养90h后,细胞密度达到46×104cells/ cm2,即细胞的扩增倍数5倍以上。初步表明625无血清培养基和天信和14L DISK生物反应器满足Vero细胞无血清大规模培养要求。

       由于在14L DISK生物反应器中无法直接取样观察细胞状态,所以细胞培养时对葡萄糖代谢、溶氧下降速率等是细胞生长主要指标的监控显得尤为重要。可用这几项指标反应细胞的生长状况,根据图2可知,随着培养时间的增加,培养液中葡糖糖含量不断减少、溶氧下降速率有明显提高,说明细胞数量正不断增长。在葡萄糖消耗量达一定量时,开启灌流,灌流速度需根据细胞耗糖情况进行适时调整。


214L DISK反应器培养数据

 

2.2 固定床生物反应器无血清培养Vero细胞的生长情况

      用细胞工厂种子细胞接种生物反应器,接种密度为8.9×104cells/ cm2,培养4天(91h),细胞密度达到45.95×104cells/ cm2即细胞的扩增倍数约5.15倍,增殖倍数高(表3)。因此用天信和DISK生物反应器可以较好的满足Vero细胞的无血清培养。

 

3DISK生物反应器培养Vero细胞数据


 

结  语  :

       天信和Industrack是一个我们与客户之间就细胞培养基研发制造应用、生物反应器设计应用及工艺过程技术等技术交流平台。
我们希望通过此平台,加强行业技术经验的交流及应用,为生物制药行业贡献一份力量。

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