天信和Industrack—Vero无血清细胞培养基技术应用交流会
- 分类:Industrack®科普课堂
- 作者:
- 来源:
- 发布时间:2019-07-11
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【概要描述】 Vero 细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。随着对疫苗质量和安全性要求的不断提高,使用无血清工艺取代血清工艺培养 Vero 细胞生产病毒疫苗已成为发展趋势。天信和(苏州)生物科技有限公司于2019年7月1日至5日举办了Industrack技术培训——Vero细胞培养基技术应用交流会。
天信和Industrack—Vero无血清细胞培养基技术应用交流会
【概要描述】 Vero 细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。随着对疫苗质量和安全性要求的不断提高,使用无血清工艺取代血清工艺培养 Vero 细胞生产病毒疫苗已成为发展趋势。天信和(苏州)生物科技有限公司于2019年7月1日至5日举办了Industrack技术培训——Vero细胞培养基技术应用交流会。
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- 发布时间:2019-07-11
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Vero 细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。随着对疫苗质量和安全性要求的不断提高,使用无血清工艺取代血清工艺培养 Vero 细胞生产病毒疫苗已成为发展趋势。天信和(苏州)生物科技有限公司于2019年7月1日至5日举办了Industrack技术培训——Vero细胞培养基技术应用交流会。
本次Vero细胞无血清培养基技术应用交流会邀请了大连雅立峰、广州诺诚、宁波荣安、吉林迈丰、长春卓谊、成都柏奥特克、北京生物制品研究所、江苏金迪克、青岛蔚蓝等9家人用/兽用疫苗单位的老师们参加。 培训交流过程从Vero细胞无血清消化、传代等关键点控制,到细胞扩增至14L DISK生物反应器培养,进行技术应用实操和交流,期间成都柏奥特克黄林老师分享了使用天信和Vero细胞无血清培养基进行人用狂犬疫苗生产方面的心得体会。
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Vero细胞方瓶、细胞工厂贴壁培养传代实验
笔记关键词:使用经625无血清培养基(天信和Vero细胞无血清培养基)驯化完成的Vero细胞,在方瓶和细胞工厂中进行连续传代扩增,可以保持良好的生长速率和生长状态,培养3天,细胞可增殖4~5倍左右。
图1:625培养基培养Vero细胞72h
从图1可见,Vero细胞在方瓶中无血清培养72h后,细胞轮廓清晰,立体感强。
表1. Vero无血清细胞培养3天生长情况(方瓶)
培养规格 |
T25 |
T75 |
T175 |
传代比例 |
1:4-1:6 |
||
传代细胞量 (cells) |
2*106 |
7*106 |
1.8*107 |
细胞总量 (cells) |
1*107 |
3*107 |
7*107 |
表2. Vero无血清细胞培养3天生长情况(细胞工厂)
培养规格 |
5层细胞工厂 |
10层细胞工厂 |
传代比例 |
1:4 |
|
传代细胞量 (cells) |
3.5*108 |
7*108 |
细胞总量 (cells) |
1.3*109 |
2.5*109 |
从表1、表2可见, 在无血清的连续传代过程中,Vero细胞在625 无血清培养基中保持有良好的生长状态和生长速率。增殖比例基本在4-5倍左右。
14L固定床生物反应器无血清培养Vero细胞
笔记关键词:使用625无血清培养基和天信和14L DISK生物反应器进行Vero细胞无血清大规模培养,为后期Vero无血清生物反应器生产狂犬疫苗工艺打下基础。14L固定床反应器装载70g片状载体,培养结束后采用结晶紫染色法进行细胞核计数。
固定床生物反应器培养Vero细胞时细胞生长情况
使用细胞工厂进行种子细胞的扩增,消化3个 10层细胞工厂接种生物反应器,接种密度为9×104cells/ cm2,由于技术交流时间有限,在培养90h后,细胞密度达到46×104cells/ cm2,即细胞的扩增倍数5倍以上。初步表明625无血清培养基和天信和14L DISK生物反应器满足Vero细胞无血清大规模培养要求。
由于在14L DISK生物反应器中无法直接取样观察细胞状态,所以细胞培养时对葡萄糖代谢、溶氧下降速率等是细胞生长主要指标的监控显得尤为重要。可用这几项指标反应细胞的生长状况,根据图2可知,随着培养时间的增加,培养液中葡糖糖含量不断减少、溶氧下降速率有明显提高,说明细胞数量正不断增长。在葡萄糖消耗量达一定量时,开启灌流,灌流速度需根据细胞耗糖情况进行适时调整。
图2:14L DISK反应器培养数据
固定床生物反应器无血清培养Vero细胞的生长情况
用细胞工厂种子细胞接种生物反应器,接种密度为8.9×104cells/ cm2,培养4天(91h),细胞密度达到45.95×104cells/ cm2,即细胞的扩增倍数约5.15倍,增殖倍数高(表3)。因此用天信和DISK生物反应器可以较好的满足Vero细胞的无血清培养。
表3:DISK生物反应器培养Vero细胞数据
培养规格 |
T25 |
T75 |
T175 |
传代比例 |
1:4-1:6 |
||
传代细胞量 (cells) |
2*106 |
7*106 |
1.8*107 |
细胞总量 (cells) |
1*107 |
3*107 |
7*107 |
接种密度 |
8.9×104cells/ cm2 |
最终生长密度 |
45.95×104cells/ cm2 |
扩增倍数 |
5.15 |
培养时间 |
91h |
结语
天信和Industrack是一个我们与客户之间就细胞培养基研发制造应用、生物反应器设计应用及工艺过程技术等技术交流平台,我们希望通过此平台,加强行业技术经验的交流及应用,为生物制药行业贡献一份力量。
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