Vero 细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。随着对疫苗质量和安全性要求的不断提高，使用无血清工艺取代血清工艺培养 Vero 细胞生产病毒疫苗已成为发展趋势。天信和（苏州）生物科技有限公司于2019年7月1日至5日举办了Industrack技术培训——Vero细胞培养基技术应用交流会。

本次Vero细胞无血清培养基技术应用交流会邀请了大连雅立峰、广州诺诚、宁波荣安、吉林迈丰、长春卓谊、成都柏奥特克、北京生物制品研究所、江苏金迪克、青岛蔚蓝等9家人用/兽用疫苗单位的老师们参加。 培训交流过程从Vero细胞无血清消化、传代等关键点控制，到细胞扩增至14L DISK生物反应器培养，进行技术应用实操和交流，期间成都柏奥特克黄林老师分享了使用天信和Vero细胞无血清培养基进行人用狂犬疫苗生产方面的心得体会。

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Vero细胞方瓶、细胞工厂贴壁培养传代实验

笔记关键词：使用经625无血清培养基（天信和Vero细胞无血清培养基）驯化完成的Vero细胞，在方瓶和细胞工厂中进行连续传代扩增，可以保持良好的生长速率和生长状态，培养3天，细胞可增殖4～5倍左右。

   图1：625培养基培养Vero细胞72h

       从图1可见，Vero细胞在方瓶中无血清培养72h后，细胞轮廓清晰，立体感强。

表1. Vero无血清细胞培养3天生长情况（方瓶）

表2. Vero无血清细胞培养3天生长情况（细胞工厂）

从表1、表2可见， 在无血清的连续传代过程中，Vero细胞在625 无血清培养基中保持有良好的生长状态和生长速率。增殖比例基本在4-5倍左右。

14L固定床生物反应器无血清培养Vero细胞

笔记关键词：使用625无血清培养基和天信和14L DISK生物反应器进行Vero细胞无血清大规模培养，为后期Vero无血清生物反应器生产狂犬疫苗工艺打下基础。14L固定床反应器装载70g片状载体，培养结束后采用结晶紫染色法进行细胞核计数。

固定床生物反应器培养Vero细胞时细胞生长情况

使用细胞工厂进行种子细胞的扩增，消化3个 10层细胞工厂接种生物反应器，接种密度为9×104cells/ cm2，由于技术交流时间有限，在培养90h后，细胞密度达到46×104cells/ cm2，即细胞的扩增倍数5倍以上。初步表明625无血清培养基和天信和14L DISK生物反应器满足Vero细胞无血清大规模培养要求。

由于在14L DISK生物反应器中无法直接取样观察细胞状态，所以细胞培养时对葡萄糖代谢、溶氧下降速率等是细胞生长主要指标的监控显得尤为重要。可用这几项指标反应细胞的生长状况，根据图2可知，随着培养时间的增加，培养液中葡糖糖含量不断减少、溶氧下降速率有明显提高，说明细胞数量正不断增长。在葡萄糖消耗量达一定量时，开启灌流，灌流速度需根据细胞耗糖情况进行适时调整。

图2：14L DISK反应器培养数据

固定床生物反应器无血清培养Vero细胞的生长情况

用细胞工厂种子细胞接种生物反应器，接种密度为8.9×104cells/ cm2，培养4天（91h），细胞密度达到45.95×104cells/ cm2，即细胞的扩增倍数约5.15倍，增殖倍数高（表3）。因此用天信和DISK生物反应器可以较好的满足Vero细胞的无血清培养。

表3：DISK生物反应器培养Vero细胞数据

结语

      天信和Industrack是一个我们与客户之间就细胞培养基研发制造应用、生物反应器设计应用及工艺过程技术等技术交流平台，我们希望通过此平台，加强行业技术经验的交流及应用，为生物制药行业贡献一份力量。